Charakterystyka Exosom

Liczbę i wielkość cząstek mierzono za pomocą analizy śledzenia nanocząstek (NTA, NanoSight Ltd., Amesbury, Wiltshire, UK) (reprezentatywne surowe dane patrz Dodatkowy materiał online, rysunek S3B). Jeden miligram białka zawierał ~ 2,2 × 1011 cząstek, a średnia średnica cząstek wynosiła 192 ± 17 nm (patrz materiał uzupełniający online, rysunek S3C i D). Ta średnica jest większa niż zwykle opisywana dla egzosomów, ponieważ wykorzystuje się analizę śledzenia nanocząstek na normalnie uwodnionych ekosomach do pomiaru.22,23

Egzosomy śródmięśniowe, ale nie wewnątrz-wieńcowe, zmniejszają wielkość zawału i zachowują funkcję lewej komory

Figura 1A pokazuje reprezentatywne obrazy AAR, MVO i IS (ocenione odpowiednio przez zabarwienie na fioletu gencjana, tioflawinę T i trifenyl tetrazoliowy (TTC)) w grupach kontrolnych, egzosomach IC i grupach egzosomowych IM. Rozległość urazu niedokrwiennego była podobna w trzech grupach, co wykazano za pomocą identycznego stosunku LV (21 ± 4% wartości LV, P = 0,49, fig. 1B). Czterdzieści osiem godzin po leczeniu zakres MVO / AAR wynosił 58 ± 6% w grupie kontrolnej w porównaniu z 43 ± 6% (P = 0,03 w porównaniu z placebo) w grupie exosomów IC i 33 ± 14% (p <0,05). 0,001 względem kontroli) w grupie exosomów IM (ryc. 1C). Podczas gdy MVO zmniejszyło się w obu grupach exosomów, IS w punkcie końcowym zmniejszyło się tylko po dostarczeniu IM egzosomów (IS / AAR = 80 ± 5% w kontroli w porównaniu z 77 ± 5% i 61 ± 12% w exosomach IC i exosomach IM, odpowiednio, P = 0,001, rysunek 1D). Konsekwentnie, pomimo podobnych objętości końcowo-rozkurczowych LV końcowych oraz LVEF przed leczeniem, parametry te były zachowane tylko w grupie exosomowej IM w punkcie końcowym; objętość komory wzrosła, a LVEF zmniejszyła się zarówno w grupach placebo, jak i IC (rysunek 1E-G).

Rysunek 1
Ostry zawał mięśnia sercowego: rozmiar zawału, niedrożność mikronaczyniowa i retencja. (A) Reprezentatywne obrazy przekrojów serca w świetle UV (górne panele) i po barwieniu TTC (dolne panele) w kontroli, dójno-mimośrodowe i świnki leczone śródłem oczodołu. W świetle ultrafioletowym niedrożność naczyń krwionośnych wydaje się ciemna, a fluorescencja terenowa zagrożona; po wybarwieniu TTC blizna jest biała, a obszar zagrożony czerwienią; niedokrwienne miokardium wydaje się fioletowe. Połączone dane pokazują, że obszar zagrożony / lewa komora jest podobny w trzech grupach (B), zarówno wewnątrzczaszkowe jak i śródmięśniowe egzosomy zmniejszają niedrożność mikronaczyńową w porównaniu z kontrolnymi (C), a śródmięśniowe egzosomy, ale nie w domieszkach śródrdzeniowych, zmniejszają rozmiar blizny w porównaniu z kontrolą (D). Egzosomy śródmięśniowe (ale nie egzo-ronalne) zachowują lewokomorową objętość końcowoskurczową (E) i końcową skurczową (F) oraz frakcję wyrzutową lewej komory. (H) Śledzenie bioluminescencji w sercu podawanym drogą infuzyjną drogą donaczyniową z egzosomami znakowanymi daleko czerwonym kolorem (po lewej) i innym sercem, do którego wstrzyknięto domięśniowo egzosomy (po prawej); intensywność sygnału jest znacznie większa po wstrzyknięciu śródczaszkowym.
Wyświetl slajd largeDownload
Ostry zawał mięśnia sercowego: rozmiar zawału, niedrożność mikronaczyniowa i retencja. (A) Reprezentatywne obrazy przekrojów serca w świetle UV (górne panele) i po barwieniu TTC (dolne panele) w kontroli, dójno-mimośrodowe i świnki leczone śródłem oczodołu. W świetle ultrafioletowym niedrożność naczyń krwionośnych wydaje się ciemna, a fluorescencja terenowa zagrożona; po wybarwieniu TTC blizna jest biała, a obszar zagrożony czerwienią; niedokrwienne miokardium wydaje się fioletowe. Połączone dane pokazują, że obszar zagrożony / lewa komora jest podobny w trzech grupach (B), zarówno wewnątrzczaszkowe jak i śródmięśniowe egzosomy zmniejszają niedrożność mikronaczyńową w porównaniu z kontrolnymi (C), a śródmięśniowe egzosomy, ale nie w domieszkach śródrdzeniowych, zmniejszają rozmiar blizny w porównaniu z kontrolą (D). Egzosomy śródmięśniowe (ale nie egzo-ronalne) zachowują lewokomorową objętość końcowoskurczową (E) i końcową skurczową (F) oraz frakcję wyrzutową lewej komory. (H) Śledzenie bioluminescencji w sercu podawanym drogą infuzyjną drogą donaczyniową z egzosomami znakowanymi daleko czerwonym kolorem (po lewej) i innym sercem, do którego wstrzyknięto domięśniowo egzosomy (po prawej); intensywność sygnału jest znacznie większa po wstrzyknięciu śródczaszkowym.
Aby ustalić, czy obniżona IS i zachowana funkcja były związane ze zmniejszoną apoptozą lub zmniejszoną infiltracją komórek zapalnych, procesy te badano stosując odpowiednio końcowe znakowanie końcowe nici dUTP (TUNEL) i barwienie CD45 na końcowej deoksynukleotydylowej transferazie. TUNEL (reprezentatywne obrazy na Figurze 2A) ujawnił, że udział kardiomiocytów TUNEL-dodatnich był zmniejszony w traktowanym exosomie IM w porównaniu ze świniami kontrolnymi i IC exosome, co zaobserwowano zarówno w zawale (Figura 2B), jak i strefach granicznych (fig. 2C). Równolegle, stosując barwienie CD45 (reprezentatywne obrazy, Figura 2D), zaobserwowaliśmy, że infiltracja leukocytów.
[patrz też: rejestracja dawców szpiku, topinambur allegro, leczenie po amputacji palca ]